人原代髓核原代細(xì)胞
商品屬性：
規(guī)格 | 5x105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 | 貨號(hào) | EY-XY3345 |
種屬來源 | 人 | 組織來源 | 脊髓 |
生長(zhǎng)特性 | 貼壁生長(zhǎng) | 形態(tài)特征 | 長(zhǎng)梭形細(xì)胞，不規(guī)則細(xì)胞 |
形態(tài)：長(zhǎng)梭形細(xì)胞，不規(guī)則細(xì)胞
培養(yǎng)基：人髓核細(xì)胞專用培養(yǎng)基
培養(yǎng)環(huán)境：氣相：95%空氣+5%二氧化碳;溫度：37℃
傳代特征：可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)最佳
細(xì)胞基本屬性：
種屬來源：人
組織來源：脊髓脊髓
生長(zhǎng)特性：貼壁生長(zhǎng)
產(chǎn)品規(guī)格：5x105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶
換液頻率：每2-3天換液一次
消化液：0.25%胰蛋bai酶
產(chǎn)品貨期：7-8周左右
運(yùn)輸方式：T25培養(yǎng)瓶/ 順豐快遞（包郵）
供應(yīng)限制：僅限于科學(xué)研究，絕不可作為動(dòng)物或人類疾病的治療產(chǎn)品使用
背景介紹：:髓核，是乳白色半透明膠狀體，富于彈性，為椎間盤結(jié)構(gòu)的一部分，位于兩軟骨板與纖維環(huán)之間。由縱橫交錯(cuò)的纖維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)即軟骨細(xì)胞和蛋白多糖黏液樣基質(zhì)構(gòu)成的彈性膠凍物質(zhì)。
發(fā)育成熟的髓核是一個(gè)由軟骨樣細(xì)胞分散在細(xì)胞間質(zhì)內(nèi)，周圍圍繞著一個(gè)比較致密的膠原纖維網(wǎng)的含水球，位于椎間盤偏后位置，占推間盤橫斷面積的50%～60%；由于它的含水量很高，并和軟骨終板緊密接觸，是椎間盤接受經(jīng)軟骨終板主要營(yíng)養(yǎng)途徑滲透交換營(yíng)養(yǎng)的主要部分。
下腰痛是臨床常見病，其病因主要是椎間盤退變所致。椎間盤退變的主要機(jī)制首先是椎間盤內(nèi)髓核細(xì)胞逐漸衰老、凋亡，并導(dǎo)致細(xì)胞外基質(zhì)的化學(xué)成分和結(jié)構(gòu)改變。
細(xì)胞培養(yǎng)操作：
收貨處理取出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2，飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)
傳代密度細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)
傳代代數(shù)可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)最佳
傳代比例傳代建議1：2傳代，1:2傳代就是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)T25瓶或者2個(gè)6cm皿。不是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)10cm皿
傳代方法：
1.吸出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細(xì)胞一次；
2.添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中，輕微轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個(gè)培養(yǎng)瓶底后，吸出多余消化液，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化；
3.用吸管輕輕吹打混勻，按1:2比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代，然后補(bǔ)充新鮮的培養(yǎng)基至5mL，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)；
4.待細(xì)胞貼壁后，培養(yǎng)觀察；之后每2-3天換液一次新鮮的培養(yǎng)基。
原代細(xì)胞培養(yǎng)的主要步驟包括：
?一、剝離組織，去除外膜、結(jié)締組織等?：將組織從動(dòng)物體中取出，并去除可能存在的外膜或結(jié)締組織等雜質(zhì)。
二、?洗滌后將組織剪成1mm左右的小塊?：使用生理鹽水或其他適當(dāng)?shù)木彌_液洗滌組織，然后將其剪成約1mm大小的小塊。
三、?用0.1%～0.2%的消化?：將剪碎的組織塊加入含有0.1%～0.2%的緩沖液中，進(jìn)行消化。消化時(shí)間可根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)需求選擇熱消化（37℃）或冷消化（4℃），熱消化時(shí)間短，冷消化時(shí)間長(zhǎng)但條件更溫和。
?四、吹打分散后，過濾、計(jì)數(shù)?：將消化后的細(xì)胞吹打到一個(gè)離心管中，然后過濾、計(jì)數(shù)。
五、?按30萬(wàn)/毫升分瓶培養(yǎng)?：將計(jì)數(shù)后的細(xì)胞按30萬(wàn)/毫升的濃度分瓶培養(yǎng)。
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