實驗要點及說明：
1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng)，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應該為優(yōu)質玻璃，并經過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
公司細胞廣泛用于國內院校的細胞生物學研究，作為實驗項目研究。下列產品詳細介紹：
產品名稱 | 生長特性 | 貨號 |
有袋大鼠腎細胞；PtK1(NBL-3) | 貼壁生長 | EY-X63515 |
?
細胞名稱 有袋大鼠腎細胞；PtK1(NBL-3)
形態(tài)特性: 上皮樣
生長特性: 貼壁生長
特征特性: 1962年，K.H.Walen從表觀正常的有袋大鼠的腎建立了PtK1細胞株。免疫過氧化物染色顯示角蛋白陽性。
培養(yǎng)條件: MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)優(yōu)質胎牛血清，10%
傳代方法: 消化3-5分鐘。1:2。3天內可長滿。
傳代情況: PN5
凍存條件: 基礎培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測: 陰性
冷凍保存細胞之方法
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大??；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
操作步驟:
1、貼壁細胞的消化
①吸除培養(yǎng)液，用無菌 PBS、Hanks 液或無血清培養(yǎng)液洗滌細胞一次，以去除殘余的血清。
②加入少量 源葉生物 Trypsin-EDTA solution，略蓋過細胞即可，室溫放置 0.5～2min， 不同的細胞消化時間有所不同。
③顯微鏡下觀察，細胞明顯收縮，并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現細胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變
化；或者用槍吹打細胞發(fā)現細胞剛好可以被吹打下來，吸除細胞消化液。加入含血清的 *細胞培養(yǎng)液，吹打下細胞，即可直接用于后續(xù)實驗。
④如果發(fā)現消化不足，則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果發(fā)現細胞消化時間過長，未及吹打細胞，細胞已經有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落， 直接用細胞培養(yǎng)液把細胞全部吹打下來。1000～2000g 離心 1min，沉淀細胞，盡量去除細胞消化液后，加入含血清的*培養(yǎng)液重新懸浮細胞，即可用于后續(xù)實驗。
2、組織的消化不同的組織需要消化的時間相差很大，通常以消化后可以充分打散組織為宜。
Homo sapiens, human細胞名稱: 小鼠雜交瘤細胞；3H8H10 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..細胞名稱: 小鼠雜交瘤細胞；2H7 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
Aureobasidium pullulans (de Bary) Arnaud細胞名稱: 皰疹病單抗雜交瘤細胞；C5Mcab RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
freeze-dried細胞名稱: 小鼠雜交瘤細胞；1F8G5D6D2 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..細胞名稱: 小鼠雜交瘤細胞；2A3 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
Phytophthora megasperma f. sp.medicagini ..細胞名稱: 小鼠雜交瘤細胞；IE6-A2 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
Flexibacter tractuosus (Lewin) Leadbetter細胞名稱: 抗人大腸癌單抗雜交瘤細胞；CYL-1 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
Hyphodontia subalutacea (Karsten) Eriksson細胞名稱: 抗人大腸癌單抗雜交瘤細胞；CYL-4 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
freeze-dried細胞名稱: 抗人大腸癌單抗雜交瘤細胞；CYL-2 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hanse ..細胞名稱: 抗人大腸癌單抗雜交瘤細胞；CYL-3 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..細胞名稱: 抗人大腸癌單抗雜交瘤細胞；CYL-5 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
frozen細胞名稱: 小鼠雜交瘤細胞；1H7F8C12E5 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
frozen細胞名稱: 小鼠雜交瘤細胞；1D5H12F11F8 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
Bacillus licheniformis (Weigmann) Chester細胞名稱: 小鼠雜交瘤細胞；3D10 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..細胞名稱: 抗人pirin單抗雜交瘤細胞；IIIA3bC1E12D1 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..細胞名稱: 抗人EIFIAY單抗雜交瘤細胞；B4B5C5 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
有袋大鼠腎細胞；PtK1(NBL-3)人載脂蛋白E(Apo-E)ELISA試劑盒PAELISAKit產品規(guī)格:48T/96T。
人血小板膜糖蛋白Ⅳ(GP-Ⅳ)ELISA試劑盒PAELISAKit產品規(guī)格:48T/96T。
人心鈉肽(ANP)ELISA試劑盒PAELISAKit產品規(guī)格:48T/96T。
人FMS樣酪氨激酶3配體(Flt-3L)ELISA試劑盒PCPELISAKit產品規(guī)格:48T/96T。
人FMS樣酪氨激酶3(Flt3)ELISA試劑盒PCTELISAKit產品規(guī)格:48T/96T。
人型纖溶酶原激活物(uPA)ELISA試劑盒PCTELISAKit產品規(guī)格:48T/96T。
人型纖溶酶原激活物受體(PLAUR/uPAR)ELISA試劑盒PCXELISAKit產品規(guī)格:48T/96T。
人肌激酶同工酶MB(CK-MB)ELISA試劑盒PDELISAKit產品規(guī)格:48T/96T。
點擊放大
