以下是軍團菌屬通用PCR試劑盒步驟的詳細說明書：
產(chǎn)品名稱 | 軍團菌屬通用PCR試劑盒步驟 |
英文名稱 | Legionella spp. PCR |
編號 | EY00P751 |
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軍團菌屬通用PCR試劑盒步驟注意事項：
1．基礎(chǔ)程序；
2．擴增溫度和延伸溫度；
3．反應(yīng)時間；
4．循環(huán)次數(shù)；
5．PCR 反應(yīng)液的配制；
6．PCR技術(shù)的基本原理；
7．PCR的反應(yīng)動力學(xué)；
8．PCR擴增產(chǎn)物；
9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。
需要自備的器材：
1．軍團菌屬通用PCR試劑盒步驟儀器：分析天平、離心機、熒光 PCR 擴增儀、組織研磨器、-20 ℃冰箱、可調(diào)移液器（2 µL、20
µL、200 µL、1000 µL）。
2．耗材：熒光 PCR 反應(yīng)管、眼科剪、眼科鑷、生理鹽水、1.5 mL 經(jīng)焦碳酸二乙酯（DEPC）水
處理的滅菌離心管、吸頭（10 µL、200 µL、1000 µL）、滅菌雙蒸水。
特點：
1.即開即用，用戶只需要提供樣品 DNA 模板，操作簡單，定量準確快速。
2. 引物經(jīng)過優(yōu)化，特異性強。預(yù)期的 PCR 產(chǎn)物長度為 560 bp。
3. PCR mix 中含上樣染料，PCR 后可以直接上樣電泳。
4. 提供陽性對照，便于分析試驗結(jié)果。
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麥康凱瓊脂基礎(chǔ)(SMAC)2550g用于致病性大腸桿菌(包括O7)的分離培養(yǎng)(SN/T0973-2000和SN/T2006)。
Peptone-E (Gelatin Peptone) 蛋白胨 E 100g incubation media Peptone-E (Gelatin Peptone) 蛋白胨 E 100g
謝瓦曲霉 支/瓶
DextroseAgar
ArginineBrothacc.ToSchubert
SCHAEDLER瓊脂250g用于厭氧菌的分離培養(yǎng)
BETA-SSA瓊脂 BETA-SSA Agar 用于鏈球菌的選擇性分離培養(yǎng)
假單胞分離瓊脂 Pseudomonas Isolation Agar 250 用于假單胞菌群的測定
葡萄糖蛋白胨培養(yǎng)基250g/瓶用于真菌和腐生菌的檢驗incubationmedia葡萄糖蛋白胨培養(yǎng)基250g/瓶用于真菌和腐生菌的檢驗
2216ELiquidMedium
NBB培養(yǎng)基250g用于啤酒中厭氧菌檢測
乳酸桿菌肉湯培養(yǎng)基 Lactobacillus broth Medium 用于乳酸桿菌增菌培養(yǎng)
EYA培養(yǎng)基基礎(chǔ) Egg Yolk Agar Medium Base 250克 肉毒梭菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌的分離培養(yǎng)
碎肉培養(yǎng)基250g/瓶用于痤瘡桿菌的培養(yǎng)，不含維生素K，需添加(庖肉牛肉粒)incubationmedia碎肉培養(yǎng)基250g/瓶用于痤瘡桿菌的培養(yǎng)，不含維生素K，需添加(庖肉牛肉粒)
THBMedium
子宮成纖維細胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml)
CGA Others Human 人 FSH alpha / TSH alpha / CGA 人細胞裂解液 (陽性對照)
敘利亞倉鼠皮膚細胞;GH-S1
人APP-PS1(M146L)雙基因轉(zhuǎn)染CHO細胞株;7WML6.0 癌細胞，MDA-MB-453細胞 GIK細胞，草魚腎細胞系
人皮膚成纖維細胞;CCC-HSF-1
HA Others H9N2 甲型流感 H9N2 (A/Guinea fowl/Hong Kong/WF10/99) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 人細胞裂解液 (陽性對照)
DCS 小鼠樹突狀細胞肉瘤細胞
成骨細胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml)
人脈絡(luò)絲表皮細胞 (HCPEpiC)( 5×105 )
人皮膚鱗癌細胞;A-431 [A431] 大鼠小腸粘膜上皮細胞*培養(yǎng)基 100mL
大鼠肝細胞瘤;H4-II-E-C3
EFNA2 Others Mouse 小鼠 EFNA2 / Ephrin-A2 人細胞裂解液 (陽性對照)
軍團菌屬通用PCR試劑盒步驟BIU-87 人淺表性膀胱癌細胞
BT474 人導(dǎo)管癌細胞
BxPC-3 人原位胰腺腺癌細胞
C26瘤 結(jié)腸癌
使用方法：
注：軍團菌屬通用PCR試劑盒步驟所有試劑使用前需*解凍，混合均勻，6,000rpm離心數(shù)秒后使用。
1. 樣本處理（樣本處理區(qū)）
待檢樣本的核酸提取可采用病毒RNA提取試劑盒或自動化核酸提取儀等，具體提取方法請參照相關(guān)說明書；陽性質(zhì)控品及陰性質(zhì)控品無需提取，可直接使用。
2. 擴增試劑準備（PCR前準備區(qū)）
取N個（N=陰性質(zhì)控品+待檢樣本+陽性質(zhì)控品）PCR反應(yīng)管，每管分別加入FMD RT-PCR反應(yīng)液19μl、RT-PCR酶1 μl (也可根據(jù)每頭份用量計算N+1份FMD RT-PCR反應(yīng)液、RT-PCR酶所需總量，兩者混勻離心后分裝20 μl至單個PCR反應(yīng)管)。
組分每頭份用量FMD RT-PCR反應(yīng)液19 μlRT-PCR酶。
1 .將所有PCR反應(yīng)管于6,000rpm離心30s，轉(zhuǎn)移至樣本處理區(qū)。
2.加樣（樣本處理區(qū)）
3.在上述的PCR反應(yīng)管中分別加入待檢樣本RNA提取物、陰性質(zhì)控品和陽性質(zhì)控品各5 μl，蓋緊管蓋，于6,000rpm離心10s，轉(zhuǎn)移至擴增區(qū)。
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