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小鼠心鈉肽(ANP)elisa酶聯(lián)免疫試劑盒競爭法自視判斷

點(diǎn)擊次數(shù):961 更新時間:2020-10-20

    競爭法ELISA不易用自視判斷結(jié)果,因肉眼很難辨別弱陽性反應(yīng)與陰性對照的顯色差異,一般均用比色計測定,讀出S、P和N的吸光值。計算方法主要也有兩種,即陽性判定值法和抑制率法。

    在競爭法小鼠心鈉肽(ANP)elisa酶聯(lián)免疫試劑盒中,陰性孔呈色深于陽性孔。陰性呈色的強(qiáng)度取決于反應(yīng)中酶結(jié)合物的濃度和加入競爭抑制物的量,一般調(diào)節(jié)陰性對照的吸光度在1.0-1.5之間,此時反應(yīng)zui為敏感。

a. 陽性判定值法

    與間接法和夾心法中的陽性判定值法基本相同,ELISA試劑盒但在計算公式中引入陽性對照A值,現(xiàn)舉某種檢測抗HBc的試劑盒為例。試劑盒中的陰性對照為不含抗HBc的復(fù)鈣人血漿,陽性對照中抗HBc含量為125±100u/ml。每次試驗(yàn)設(shè)2個陽性對照和3個陰性對照。測得A值后,先計算陰性對照A值的平均值(NCX)和陽性對照A值的平均數(shù)(PCX),兩個平均數(shù)的差(N-P)必須大于一個特定的數(shù)值(例如0.300),試驗(yàn)才有效。3個陰性對照A值均應(yīng)小于2.000,而且應(yīng)≥0.5×NCX并≤1.5×NCX,如其中之一超出此范圍,則棄去,而以另2個陰性對照重新計算×NCX;如有2個陰性對照A超出以上范圍,則該次實(shí)驗(yàn)無效。陽性判定值按下式計算:陰性判定值=0.4×NCX+0.6×PCX,標(biāo)本A值≤陽性判定值的反應(yīng)為陽性,A>陽性判定值的反應(yīng)為陰性。 

b. 抑制率法 

    抑制率表示標(biāo)本在競爭結(jié)合中標(biāo)本對陰性反應(yīng)顯色的抑制程度,按下式計算:

    抑制率(%)= ELISA試劑盒(陰性對照A值-標(biāo)本A值)×100/陰性對照A值,一般規(guī)定抑制率≥50%為陽性,<50%為陰性。

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