ELISA試劑盒的解決辦法
ELISA試劑盒的解決辦法
血清是zui常用的人ELISA試劑盒標(biāo)本，血漿一般可視為與血清同等的標(biāo)本，標(biāo)本引起的假陽性和假陰性結(jié)果主要是干擾性物質(zhì)所致，分為內(nèi)源性物質(zhì)和外源性物質(zhì)兩種,本文主要為大家介紹內(nèi)源性物質(zhì)：
內(nèi)源性物質(zhì)： 有人認(rèn)為大約40%的人血清標(biāo)本中含有非特異性干擾物質(zhì)，可以不同程度影響檢測結(jié)果。常見的干擾物質(zhì)有：類風(fēng)濕因子、補(bǔ)體、嗜異性抗體、嗜靶抗原自身抗體、醫(yī)源性誘導(dǎo)的抗鼠Ig (s)抗體、交叉反應(yīng)物質(zhì)和其它物質(zhì)等。
（1）類風(fēng)濕因子
人血清中IgM、IgG型類風(fēng)濕因子（RF）可以與人ELISA試劑盒系統(tǒng)中的捕獲抗體及酶標(biāo)記二抗的FC段直接結(jié)合，從而導(dǎo)致假陽性。
解決該情況的辦法是：
①用F(ab)2替代完整的IgG；
②標(biāo)本用聯(lián)有熱變性（63℃，10 min）IgG的固相吸附劑處理（將熱變性IgG加入到標(biāo)本稀釋液中同樣有效）；③檢測抗原時(shí)，可以用2-巰基乙醇等加入到標(biāo)本稀釋液中，使RF降解。
（2）補(bǔ)體 ELISA系統(tǒng)中固相一抗和標(biāo)記二抗過程中，人ELISA試劑盒抗體分子發(fā)生變構(gòu)，其FC段的補(bǔ)體C1q分子結(jié)合位點(diǎn)被暴露出來，使C1q 可以將二者連接起來，人ELISA試劑盒從而造成假陽性。解決的辦法是：①用EDTA稀釋標(biāo)本；②用53℃，10 min或56℃，30 min加熱血清使C1q滅活。
（3）嗜異性抗體 人類血清中含有能與嚙齒類動物（如鼠等）Ig (s) 結(jié)合的天然嗜異性抗體，可將ELISA系統(tǒng)中一抗和二抗連接起來，也能造成假陽性。解決的辦法是：可在標(biāo)本稀釋液中加入過量的動物Ig (s) ，但加入量不足或亞類不同時(shí)無效。
